流式細胞術
流式細胞分析術(Flow cyrometry, FCM)是一種先進的細胞定性定量分析技術,已廣泛用于研究和臨床實踐中。
原理
一束單色光(通常是激光)照射流體力學聚焦的一股流體上。若干個檢測器瞄向流束和激光相交的這個點,其中一個和激光在同一直線上(稱作前散射,FSC),其它幾個和激光垂直(旁散射,SSC和一個或幾個熒光監測器),前散射與細胞體積相關,而旁散射取決于微粒的內部復雜程度(比如核的形狀、胞質內顆粒的種類或者膜的粗糙程度)。當每個懸浮微粒通過光束時會按某種方式產生光散射,同時所帶有的熒光化合物被激發并發射出波長大于激發光的熒光。這些散射光和熒光的組合數據被檢測器記錄,根據各檢測器亮度的波動(每個細胞會顯出一個散射或熒光的峰)就能夠推算出每個顆粒的物理和化學性質,從而對細胞(或微粒)的理化、生物學性狀和功能狀態等進行定性或定量檢測,方法簡便快捷,靈敏度高。
應用
流式細胞術在很多領域中都有應用,包括分子生物學、病理學、免疫學、海洋生物學、醫學等。特別是使用熒光標記的特異性抗體與靶細胞上的抗原結合,能夠通過流式細胞儀研究這些細胞的特別信息,在生命科學和醫學(尤其是器官移植、血液學、腫瘤免疫學和化療、遺傳學)領域中具有很廣泛的應用。現代的流式細胞儀具有多個激光和熒光檢測器,可以用于多色熒光抗體標記檢測,以便在表現型中更準確地區別某個靶群體。
同時流式細胞儀也是很有用的分選儀器。當細胞或微粒通過時,可以被選擇性地加上某種電荷,并在通過電磁場后偏轉,從不同出口流出。這樣就可以從一個混合物中高速(理論上可達到每秒大約9萬個細胞)準確地分離開四類細胞。
量子點應用
量子點作為新型熒光納米材料,具有熒光效率高、穩定性高、Stockes位移較大、發射光譜窄而對稱、單一波長多色激發等諸多優秀的熒光特性,與流式細胞術相結合,可實現更高靈敏度的檢測,并簡化儀器光源和檢測系統的設計與成本,是傳統熒光材料的有益補充和替代,在流式細胞分析中具有廣闊的應用前景。
圖1,流式細胞儀(flow cytometer)
QD-FCM應用實例:
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